申请号 | CN201811212655.X | 申请日期 | 2018-10-18 |
申请公布号 | CN109363984A | 申请公布日 | 2019-02-22 |
授权公告号 | CN109363984B | 授权公告日 | 2022-03-11 |
优先权号 | - | 优先权日 | - |
IPC分类号 |
A61Q19/08;A61K8/9789;A61Q19/02
| CPC分类号 |
-
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专利类型 | 受理局 | 中国 | |
简单法律状态 | 法律状态 | ||
申请(专利权)人 | 广州华玺生物科技有限公司,浙江大学自贡创新中心 | 发明人 | 钟晓明,吴铭杰 |
申请人地址 | 四川省自贡市高新工业园区金川路69号 | ||
代理机构 | 杭州求是专利事务所有限公司 | 代理人 | 忻明年 |
1.一种青刺果油粕发酵液的制备方法,其特征在于包括如下步骤:步骤1、以青刺果油粕与水的混合物为发酵底物,加入酶进行酶解,以乳酸菌为发酵菌种于30‑40℃进行单独发酵;步骤2:取发酵产物,离心收集上清液,即为青刺果油粕发酵液;所述的发酵产物制备实现如下:将0.2g乳酸菌干粉、8mg果胶酶、10g青刺果油粕干粉和200mL水混合,然后37℃培养48小时,然后收集整个发酵体系,即为发酵产物;所述的乳酸菌和青刺果油粕配比为10cfu:10g;当青刺果油粕发酵液为青刺果油粕乳酸菌发酵原浆时,呈淡黄色至棕黄色液体、pH=
3.6‑3.9。
2.一种青刺果油粕发酵液的制备方法,其特征在于包括如下步骤:步骤1、以青刺果油粕与水的混合物为发酵底物,加入酶进行酶解,酿酒酵母菌和乳酸菌为发酵菌种于30‑40℃进行混合发酵,得到混合发酵产物;步骤2:取混合发酵产物,离心收集上清液,即为青刺果油粕发酵液;所述的混合发酵产物的制备实现如下:将0.2g乳酸菌干粉、20mL活化后的酵母菌菌液、8mg果胶酶、10g青刺果油粕干粉和200mL水混合,37℃培养48小时,然后收集整个发酵体系,即为混合发酵产物,且酿酒酵母菌粉与乳酸菌菌粉混合的质量比为3:1;所述的酵母菌菌液的制备实现如下:将0.6g酿酒酵母EC1118干粉加入至10mL无菌水中,然后加入10mL青刺果油粕原液,35℃水浴活化酵母20min;当青刺果油粕发酵液为青刺果油粕酵母菌和乳酸菌混合发酵原浆时,呈淡黄色至棕黄色液体、pH=3.8‑4.1。
3.根据权利要求1或2所述的一种青刺果油粕发酵液的制备方法,其制备的青刺果油粕发酵液应用于制备美白抗衰老化妆品。
[0001]本发明属于生物发酵技术领域,具体涉及一种青刺果油粕发酵液及其制备方法和在化妆品中的应用。
[0002]青刺果又名阿那斯果,分布于在云南、贵州、四川、西藏等地。它主要生长于海拔1000‑3000米的高寒山区或路边,耐旱耐寒,对环境的适应能力极强。其根、叶、果、均可食用或入药,具有清热解毒、活血化瘀、消炎止痛、健胃消食等作用。此外,青刺果油成分与人体脂质十分接近,能够很好地保持皮肤表面的水分和营养,并具有很好的抗衰老作用。作为青刺果油提炼工艺中的废弃物,青刺果油粕仍含有很多如维生素、蛋白质、黄酮等活性物质。但青刺果油粕却未得到到很好的利用,成为亟待开发的植物资源之一。
[0003]近年来,发酵技术在化妆品植物活性原料开发上有着很好的应用前景,微生物不仅能够有效富集植物活性成分、提高功效,还可以降低来自植物中其他物质的毒副作用。同时,微生物发酵还能降低有机试剂的使用,减少污染及能耗,已然成为化妆品工业上的研究热点之一。本发明利用酿酒酵母或乳酸菌或其混合菌发酵青刺果油粕,制备出青刺果油粕发酵原浆,其抗氧化活性和酪氨酸酶抑制率都有不同程度的提高,为青刺果油粕的有效利用提供了一个新的理论基础。
[0004]本发明的目的是针对现有技术的不足,提供一种青刺果油粕发酵液及其制备方法与在化妆品中的应用;
[0005]本发明提供了供一种青刺果油粕发酵液的制备方法,具体包括如下步骤:
[0006]步骤1、以青刺果油粕与水的混合物为发酵底物,以酿酒酵母菌为发酵菌种于23‑30℃进行单独发酵,或以乳酸菌为发酵菌种于30‑40℃进行单独发酵,或以酿酒酵母菌和乳酸菌为发酵菌种于30‑40℃进行混合发酵,得到发酵产物;
[0007]所述的乳酸菌包括保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、乳酸乳球菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌的一种或多种的等比例混合。
[0008]酿酒酵母菌和青刺果油粕配比为10‑10cfu:5‑15g,具体为10cfu:10g;
[0009]乳酸菌和青刺果油粕配比为10‑10cfu:5‑15g,具体为10cfu:10g;
[0010]所述酿酒酵母菌发酵条件为:T=23‑30℃,20‑40小时,具体为25℃,48小时;
[0011]所述乳酸菌发酵条件为:T=30‑40℃,40‑50小时,具体为37℃,48小时;
[0012]所述的以酿酒酵母菌和乳酸菌混合发酵条件为:T=30‑40℃,40‑50小时,具体为37℃,48小时;
[0013]发酵体系为0.4‑1.0g酿酒酵母菌粉或0.1‑0.5g乳酸菌菌粉或二者混合、5‑10mg果胶酶、5‑15g青刺果油粕、180‑250mL无菌水;
[0014]当二者混合时,酿酒酵母菌粉与乳酸菌菌粉混合的质量比为3:1;
[0015]具体的:0.6g酿酒酵母菌粉或0.2g乳酸菌干粉或0.6g酿酒酵母菌粉与0.2g乳酸菌干粉混合、8mg果胶酶、10g青刺果油粕、200mL无菌水进行配比发酵;
[0016]步骤2:取发酵产物,离心收集上清液,即为青刺果油粕发酵液。
[0017]所述离心方法为:3000‑6000rpm,5‑25min,具体为4000rpm,15min;
[0018]所述当青刺果油粕发酵液为青刺果油粕酵母菌发酵原浆时,呈淡黄色至棕黄色液体、pH=4.1‑4.4;为青刺果油粕乳酸菌发酵原浆时,呈淡黄色至棕黄色液体、pH=3.6‑3.9;为青刺果油粕酵母菌和乳酸菌混合发酵原浆式,呈淡黄色至棕黄色液体、pH=3.8‑4.1。
[0019]本发明还保护一种产品,其特征为如权利要求6所述为青刺果油粕酵母菌发酵原浆,其具有抗氧化/DPPH自由基清除或/和美白功效。
[0020]本发明还保护青刺果油粕酵母菌发酵原浆的制备方法。
[0021]本发明还保护青刺果油粕酵母菌发酵原浆的应用。
[0022]本发明还保护一种产品,其特征为如权利要求6所述为青刺果油粕乳酸菌发酵原浆,其具有抗氧化/DPPH自由基清除或/和美白功效。
[0023]本发明还保护青刺果油粕乳酸菌发酵原浆的制备方法。
[0024]本发明还保护青刺果油粕乳酸菌发酵原浆的应用。
[0025]以上任一所述产品具体可为化妆品。所述化妆品包括但不限于:面膜、护肤霜或爽肤水。
[0026]本发明利用生物技术发酵技术,通过选择合适的微生物和及其发酵条件,充分利用微生物的降解及转化作用,使青刺果油提炼中的副产物得到很好的利用,发酵过程中不添加其他有机试剂,提高了安全性和环保性,得到的发酵原浆比原来拥有更高的抗氧化活性和自由基清除能力,并具有较好的美白效果。
[0027]图1不同工艺处理的青刺果油粕发酵液中多糖含量的比较
[0028]图2不同工艺处理的体积分数为3%的青刺果油粕发酵液对DPPH自由基清除效果影响
[0029]图3不同工艺处理的青刺果油粕发酵液体外对酪氨酸酶活性的影响
[0030]图4不同体积分数的青刺果油粕混合菌发酵液中对DPPH自由基清除效果具体实施方式
[0031]下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明,以便本领域的技术人员更了解本发明,但并不因此限制于本发明。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实验,结果取平均值。
[0032]酿酒酵母EC1118(Saccharomyces cerevisiae EC1118):购自法国拉曼集团。DPPH:购自西格玛奥德里奇(中国)化学有限公司,产品CAS号为1898‑66‑4。
[0033]青刺果干粉的制备方法:取青刺果(果实),充分烘干后粉碎,得到青刺果干粉。青刺果产自云南丽江。
[0034]乳酸菌干粉为保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌等比例混合后经冷冻干燥后的粉末。
[0035]实施例1、青刺果油粕酵母发酵液的制备方法
[0036]一、制备青刺果油粕原液
[0037]将烧瓶置于套式加热器中。把脱脂棉放入提取器底部,称取30g青刺果干粉于索氏提取器的提取器中,连接好烧瓶、提取器、回流冷凝管,并接通冷凝水,加热至60℃。沸腾后,溶剂的蒸气从烧瓶进到冷凝管中,冷凝后的溶剂回流到提取器中,浸取样品。溶剂在提取器内到达一定的高度时,就携带所提取的物质一同从侧面的虹吸管流入烧瓶中。溶剂就这样在仪器内循环流动,把所要提取的物质集中到下面的烧瓶内。提取时间为60min。
[0038]收集提取后的青刺果油粕于60℃烘干,将10g青刺果油粕、8mg果胶酶和200mL无菌水混合,即为青刺果油粕原液。
[0039]二、制备酵母菌菌液
[0040]将0.6g酿酒酵母EC1118干粉加入至10mL无菌水中,然后加入10mL青刺果油粕原液,35℃水浴活化酵母20min。
[0041]三、制备青刺果油粕酵母发酵原浆
[0042]
1.将20mL活化后的酵母菌菌液和200mL青刺果油粕原液混合,然后置于25℃静置发酵48h,然后收集整个发酵体系,即为发酵产物。
[0043]
2.取步骤1的产物,4000rpm离心10min,收集上清液,即为青刺果油粕发酵原浆。
[0044]四、青刺果油粕酵母菌发酵原浆的性质
[0045]青刺果油粕酵母菌发酵原浆:外观为淡黄色至棕黄色液体、pH=4.1‑4.6;粗多糖浓度为62.8mg/L,总黄酮浓度为0.21mg/mL。
[0046]实施例2、制备青刺果油粕乳酸菌发酵原浆
[0047]一、制备青刺果油粕原液
[0048]同实施例1中第一步
[0049]二、制备青刺果油粕乳酸菌发酵原浆
[0050]
1.将0.2g乳酸菌干粉、8mg果胶酶、10g青刺果干粉和200mL水混合,然后37℃培养48小时,然后收集整个发酵体系,即为发酵产物。
[0051]
2.取步骤1的产物,4000rpm离心10min,收集上清液,即为青刺果油粕乳酸菌发酵原浆。
[0052]三、青刺果油粕乳酸菌发酵原浆的性质
[0053]青刺果油粕乳酸菌发酵原浆:外观为淡黄色至棕黄色液体、pH=3.6‑3.9;粗多糖浓度为173.4mg/L,总黄酮浓度为0.22mg/mL。
[0054]实施例3、制备青刺果油粕混合发酵原浆
[0055]一、制备青刺果油粕原液
[0056]同实施例1中第一步
[0057]二、制备酵母菌菌液
[0058]将0.6g酿酒酵母EC1118干粉加入至10mL无菌水中,然后加入10mL青刺果油粕原液,35℃水浴活化酵母20min。
[0059]三、制备青刺果油粕混合发酵原浆
[0060]
1.将0.2g乳酸菌干粉、20mL活化后的酵母菌菌液、8mg果胶酶、10g青刺果干粉和200mL水混合,37℃培养48小时,然后收集整个发酵体系,即为发酵产物。
[0061]
2.取步骤1的产物,4000rpm离心10min,收集上清液,即为青刺果油粕混合发酵原浆。
[0062]四、青刺果油粕乳酸菌发酵原浆的性质
[0063]青刺果油粕乳酸菌发酵原浆:外观为淡黄色至棕黄色液体、pH=3.8‑4.1;粗多糖浓度为105.1mg/L,总黄酮浓度为0.25mg/mL。
[0064]实施例4、青刺果油粕发酵原浆作为化妆品的应用
[0065]一、青刺果油粕酵母菌/乳酸菌/混合发酵原浆的抗氧化性能检测
[0066]抗氧化活性采用DPPH法评价样品对自由基清除效率。DPPH自由基为稳定的有机自由基,大部分为人工合成,分子式为C H NO。其乙醇或甲醇溶液为紫红色,当向DPPH自由基溶液中加入去自由基剂时,紫红色溶液会被还原成淡黄色溶液,其褪色程度与接收电子数量成线性关系,因而可以通过吸光度进行定量检测。
[0067]DPPH溶液为溶解于无水乙醇、浓度为6×10 mol/L的DPPH溶液。
[0068]不同体积分数的青刺果油粕酵母菌/乳酸菌/混合发酵原浆的稀释溶剂为无水乙醇。
[0069]DPPH自由基清除实验的具体实验步骤为:
[0070]
1.青刺果油粕酵母菌/乳酸菌/混合发酵原浆0.5mL与2.5mL DPPH溶液混合(实验组);
[0071]
2.0.5mL无水乙醇与2.5mL DPPH溶液混合(空白组);
[0072]
3.室温避光静置30min后,测定三个组别的A 。
[0073]
4.DPPH自由基清除率计算公式:清除率%=(实验组‑空白组)/空白组
[0074]由图2可知,青刺果油粕经发酵过后其DPPH清除率均有不同程度的提高,且均为显著性提高。由图4可知,实施例3制备的青刺果油粕混合菌发酵原浆在5%浓度以上范围对DPPH的清除率均在80%以上。青刺果油粕发酵原浆具有很好的抗氧化活性,能够清除细胞自由基,延缓细胞衰老,具有抗衰老的作用。
[0075]二、青刺果酵母菌、乳酸菌发酵原浆的酪氨酸酶抑制率
[0076]酪氨酸酶是已知的在皮肤黑色素生物合成代谢中的一种关键酶,其活性程度与黑色素的形成的数量和沉积起主要作用。大多数美白剂是通过阻断或者抑制酪氨酸酶活性,抑制黑色素的形成以达到美白的效果。
[0077]PB缓冲液为0.1mol/L、pH=6.8的NaHPO、NaHPO缓冲液;
[0078]酪氨酸酶液为溶解于PB缓冲液中,浓度为200U/mL的酶溶液;
[0079]L‑酪氨酸溶液为溶解于PB缓冲液中,浓度为0.5mg/mL的酪氨酸溶液;
[0080]酪氨酸酶抑制实验的具体步骤为:
[0081]
1.实验组:将100μL青刺果油粕酵母菌/乳酸菌/混合发酵原浆、1.75mL的0.1mol/L pH6.8磷酸缓冲液稀释和1mL的酪氨酸酶混合,25℃孵育10min,后加入1mL的L‑酪氨酸溶液,继续孵育10min,测定其A 。
[0082]
2.对照组:将2mL的0.1mol/L pH6.8磷酸缓冲液稀释和1mL的酪氨酸酶混合,25℃孵育10min,后加入1mL的L‑酪氨酸溶液,继续孵育10min,测定其A 。
[0083]
3.实验组空白:将100μL青刺果油粕酵母菌/乳酸菌/混合发酵原浆与2.75mL的
0.1mol/L pH6.8磷酸缓冲液稀释混合,25℃孵育10min,后加入1mL的L‑酪氨酸溶液,继续孵育10min,测定其A 。
[0084]
4.对照组空白:将3mL的0.1mol/L pH6.8磷酸缓冲液稀释置于25℃孵育10min,后加入1mL的L‑酪氨酸溶液,继续孵育10min,测定其A 。
[0085]
5.酪氨酸酶抑制率%计算公式:
[0086][(对照组‑对照组空白)‑(实验组‑实验组空白)]×100/(对照组‑对照组空白)
[0087]由图3可知,青刺果油粕经发酵后提高了其酪氨酸酶抑制率,且均为显著性提高,说明青刺果油粕发酵原浆具有抑制酪氨酸酶的能力,能够抑制黑色素的形成,具有很好的美白效果。